Применение нового метода анализа РНК-белковых взаимодействий для разработки ингибиторов, блокирующих связывание РНК с белком HuR
Фото: https://kaboompics.com/ / Pexels
Оригинальное название: Application of a novel RNA-protein interaction assay to develop inhibitors blocking RNA-binding of the HuR protein
Авторы: Filcenkova L; Reisbitzer A; Joseph BP; Weber V; Carloni P
Краткое содержание
РНК-белковые взаимодействия играют важную регуляторную роль в ряде биологических процессов. Например, РНК-связывающий белок HuR (human antigen R) связывается со своими целевыми мРНК и регулирует их трансляцию, стабильность и субклеточную локализацию. HuR вовлечён в патогенетические процессы различных заболеваний. Таким образом, малые молекулы, блокирующие связывание РНК с HuR, могут быть полезны при целом ряде заболеваний. Ранее мы идентифицировали STK018404 как малую молекулу, воздействующую на взаимодействие HuR-РНК. На основе этого исследования мы определили оптимизированные соединения, используя комбинированные структурно-ориентированные и лиганд-ориентированные вычислительные подходы. Для тестирования серии этих соединений мы разработали новую систему считывания сигнала для взаимодействия HuR-РНК. Традиционные методы обнаружения РНК-белкового взаимодействия имеют ряд недостатков: они требуют значительной оптимизации реагентов и могут быть трудны для оптимизации в случае слабоэкспрессируемых молекул РНК. Считывание сигнала часто требует амплификации. Таким образом, эти методы плохо подходят для количественного анализа РНК-белковых взаимодействий. Чтобы добиться простого в исполнении, быстрого и надёжного обнаружения связывания РНК с белком, мы применили систему репортёра на основе расщеплённой люциферазы для выявления взаимодействия между HuR и его целевой РНК. Мы экспрессировали один фрагмент люциферазы в виде слитого белка с HuR. Второй фрагмент люциферазы был покрыт стрептавидином и связан с биотинилированным РНК-олигонуклеотидом, содержащим AU-богатый элемент связывания HuR. Связывание между HuR и его целевым РНК-олигонуклеотидом затем позволяло восстановить функциональную люциферазу, которую можно было обнаружить по люминесценции. Используя систему репортёра на основе расщеплённой люциферазы, мы представляем здесь серию разработанных нами оптимизированных соединений.
Продукция «Вейсфарм»
Витамины, минералы, средства для здоровья и гигиены. Разработка и производство по стандартам ЕАЭС, GMP и ISO. Продукцию можно купить в аптеках и на маркетплейсах.
Обзор научной публикации со ссылкой на первоисточник. Информация носит справочный характер, не является рекламой лекарственных средств или БАД и не заменяет консультацию специалиста.